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高效液相色譜儀常用的三種定性方法分享

更新時(shí)間:2022-06-13        閱讀:10617
高效液相色譜儀(HPLC)現(xiàn)已成為有機(jī)化學(xué)分析的重要手段之一。同樣,在食品分析中,無(wú)論是殘留分析還是成分分析,HPLC也已成為*的分析儀器。


高效液相色譜儀
分析中常用的定性方法有利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性、利用檢測(cè)器的選擇性定性和利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性等。
 

一、利用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品定性:

利用標(biāo)準(zhǔn)樣品對(duì)未知化合物定性是較常用的高效液相色譜定性方法。

由于每一種化合物在特定的色譜條件下(流動(dòng)相組成、色譜柱和柱溫等相同),其保留值具有特征性,因此,可以利用保留值進(jìn)行定性。如果在相同的色譜條件下,被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致,可以初步認(rèn)為被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品相同。若流動(dòng)相組成經(jīng)多次改變后,被測(cè)化合物的保留值仍與標(biāo)準(zhǔn)樣品的保留值一致,就能進(jìn)一步證實(shí)被測(cè)化合物與標(biāo)準(zhǔn)樣品為同一化合物。
 

二、利用檢測(cè)器的選擇性定性:

同一種檢測(cè)器對(duì)不同種類(lèi)的化合物的響應(yīng)值是不同的,而不同的檢測(cè)器對(duì)同一種化合物的響應(yīng)也是不同的。所以當(dāng)某一被測(cè)化合物同被兩種或兩種以上檢測(cè)器檢測(cè)時(shí),兩檢測(cè)器或幾個(gè)檢測(cè)器對(duì)被測(cè)化合物檢測(cè)靈敏度比值與被測(cè)化合物的性質(zhì)是密切相關(guān)的,可以用來(lái)對(duì)被測(cè)化合物進(jìn)行定性。這是雙檢測(cè)器定性的基本原理。

雙檢測(cè)器體系的聯(lián)接有串聯(lián)聯(lián)接和并聯(lián)聯(lián)接方式。當(dāng)兩種檢測(cè)器中的一種是非破壞型的,可以采用簡(jiǎn)單的串聯(lián)聯(lián)接方式,方法是將非破壞型檢測(cè)器串接在破壞型檢測(cè)器之前。若兩種檢測(cè)器都是破壞型的,需采用并聯(lián)方式聯(lián)接,方法是在色譜柱的出口端連接一個(gè)三通,分別聯(lián)接到兩個(gè)檢測(cè)器上。在高效液相色譜中常用于定性分析的雙檢測(cè)體系是紫外檢測(cè)器(UVD)和熒光檢測(cè)器(FLD)。
 

三、利用紫外檢測(cè)器全波長(zhǎng)掃描功能定性:

紫外檢測(cè)器是高效液相色譜中使用廣泛的一種檢測(cè)器。全波長(zhǎng)掃描紫外檢測(cè)器可以根據(jù)被檢測(cè)化合物的紫外光譜圖提供一些有價(jià)值的定性信息。傳統(tǒng)的方法是在色譜圖上某組分的色譜峰出現(xiàn)極大值,即濃度最大時(shí),通過(guò)停泵等手段,使組分在檢測(cè)池中滯留,然后對(duì)檢測(cè)池中的組分進(jìn)行全波長(zhǎng)掃描,得到該組分的紫外可見(jiàn)光譜圖,再取可能的標(biāo)準(zhǔn)樣品按同樣方法處理。對(duì)比兩者光譜圖即能鑒別出該組分與標(biāo)準(zhǔn)樣品是否相同。某些有特殊紫外光譜圖的化合物也可以通過(guò)對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)譜圖來(lái)識(shí)別。

此外,利用二極管陣列檢測(cè)器得到的色譜信號(hào)、時(shí)間和波長(zhǎng)的三維譜圖進(jìn)行定性,比傳統(tǒng)方法優(yōu)勢(shì)更大。



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