一、如何維護(hù)液相色譜分析柱
1.加保護(hù)柱(預(yù)柱)是保護(hù)色譜柱的有效辦法。保護(hù)柱是根內(nèi)裝填料與分離柱性質(zhì)相近的短柱,接在分離柱之前,或代替流路過(guò)濾器。保護(hù)柱的作用是收集和阻塞分離柱口的化學(xué)垃圾,這些垃圾如果直接進(jìn)入分離柱會(huì)逐漸堆積在柱頭,zui終降低柱效能。保護(hù)柱是消耗品,如分析血漿樣品,一般分析50個(gè)樣品后需更換新柱芯。
2.避免高壓沖擊液相色譜分析柱。一般色譜柱都能承受得起高壓,但經(jīng)不住突然變化的高壓沖擊,這將改變柱床體積,影響柱效。引起高壓沖擊的原因主要有:進(jìn)樣器的樣品閥的緩慢轉(zhuǎn)動(dòng)、泵啟動(dòng)太快、柱切換等操作。用手動(dòng)進(jìn)樣閥時(shí)的壓力變化不大,自動(dòng)進(jìn)樣閥由于切換較慢,可能會(huì)造成壓力沖擊。
3.合理選擇液相色譜分析柱。我們知道,選擇色譜分離柱主要根據(jù)兩點(diǎn),一是根據(jù)待測(cè)組分的分子量的大小;二是根據(jù)流動(dòng)相條件,包括PH值、離子強(qiáng)度和溶劑極性等。
4.定期沖洗液相色譜分離柱。每次分析工作結(jié)束時(shí),沖洗完緩沖鹽后,zui后要過(guò)度到用強(qiáng)溶劑沖洗柱子,如可用色譜純甲醇、乙腈沖洗反相C18柱,目的是沖去吸附在柱上的強(qiáng)保留組分。如果用甲醇/水為流動(dòng)相也應(yīng)這樣沖洗柱子,在一定程度上可恢復(fù)柱效。
二、怎樣減少液相色譜分析柱的污染
zui有效的辦法是純化樣品。我們?cè)诙嗄甑姆治龉ぷ髦邪l(fā)現(xiàn),凡是樣品純化的越干凈,分離柱的壽命就越長(zhǎng);反之,只有提取沒(méi)有純化的樣品,分離柱柱效下降較快。建立一個(gè)理想的色譜分析方法應(yīng)該有一套有效的樣品前處理方法,特別是在分析血漿和尿液樣品時(shí),要特別注意樣品的提取與純化,盡量使處理過(guò)的樣品中雜質(zhì)(如大分子蛋白、有機(jī)物等)降到zui低,保護(hù)柱頭和柱子。
提取純化好的樣品用流動(dòng)相來(lái)溶解,一方面減少色譜圖中的溶劑峰干擾,另一方面也是檢查樣品在流動(dòng)相中的溶解性,如果樣品進(jìn)樣后在流動(dòng)相中沉淀,會(huì)堵塞進(jìn)樣器和柱頭,甚至樣品分解,出現(xiàn)怪峰。如果出現(xiàn)樣品與流動(dòng)相不溶要設(shè)法改變?nèi)芙鈼l件,如更換樣品溶劑,或改進(jìn)處理樣品的方法,或過(guò)濾,去除不溶性物質(zhì)。
延長(zhǎng)液相色譜分析柱的使用壽命,我們可以從保護(hù)分離柱和減少污染兩個(gè)方面入手。
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